عنوان
شناسايي گونه هاي گوشتي با استفاده از روش تكثير هم دما به واسطه‌ي حلقه
مقطع تحصيلي
كارشناسي ارشد
چكيده
تقلب در فراورده هاي گوشتي، با توجه به پيامدهايش بر ايمني مواد غذايي، سلامت اقتصادي و اعتماد مصرف‌كنندگان، به موضوعي نگران‌كننده در صنعت مواد غذايي تبديل شده است. تقلب در گوشت به طور كلي به عنوان وارونه‌نمايي عمدي فرآورده‌هاي گوشتي براي كسب سود اقتصادي تعريف شده. در صنعت گوشت، عمده‌ترين روش تقلب شامل جايگزيني گوشت‌هاي با ارزش تجاري بالا با گوشت‌هاي گونه‌هاي ارزان‌تر يا نامطلوب است. از موارد ديگر كه كيفيت محصولات گوشتي را تحت تاثير قرار ميدهد، آلودگي هاي گوشتي نظير حشرات و لارو هاي حاصل از تخم گذاري آنها نيز كيفيت محصولات گوشتي را كاهش و سلامتي مصرف كننده را تحت تاثير قرار ميدهد. به دليل كوتاه بودن زنجيره‌ي مصرف، شناسايي تقلبات و آلودگي ها از اهميت ويژه اي برخوردار است. تكثير با واسطه حلقه (LAMP) يك روش تشخيص بسيار حساس مبتني بر DNA است كه با استفاده از مجموعه آغازگر هاي 4 تا 6 عددي و بدون نياز به دستگاه ترموسايكلر در زماني كوتاه ميتواند DNA هدف را شناسايي كند. هدف اين پژوهش، طراحي و بهينه سازي كيت تشخيصي براي شناسايي گونه هاي گوشتي گوسفند، پرندگان خوراكي و حشرات آلوده كننده گوشت بوده است. به منظور دست يابي به اين هدف، آغازگر اختصاصي گونه‌ي گوشتي گوسفند براي ژن سيتوكروم b، آغازگر عمومي پرندگان بر روي ژن GAPDH و آغازگر عمومي حشرات براي ژن 28S rRNA طراحي شد. DNA گونه هاي گوشتي و لارو حشرات با روش نمك استخراج و در واكنش شركت داده شدند. واكنش ها براي تمام مجموعه ها در دو سطح ارزيابي اختصاصي بودن و تعيين ميزان حد تشخيص آنها انجام شد و نتايج واكنش ها از سه طريق ژل الكتروفورز، رنگ سنجي رنگ هاي متصل شونده به dsDNA و PCR زمان واقعي بررسي شدند. آغازگر هاي شناسايي گوشت گوسفند با حد تشخيص 1.7 پيكوگرم بر ميكروليتر، اين گونه‌ي گوشتي را از باقي گونه ها تمايز دادند. گونه هاي گوشتي مرغ، بوقلمون، غاز و اردك توسط آغازگر هاي شناسايي عمومي گونه هاي گوشتي پرندگان با حد تشخيص 110.8 فمتوگرم بر ميكروليتر شناسايي شدند. در انتها، آغازگر هاي شناسايي حشرات آلوده كننده‌ي گوشت به طور عمومي لارو هاي مگس هاي آلوده كننده‌ي گوشت كه به طور عمده از چهار خانواده‌ي Muscidae، Calliphoridae، Sarcophagidae و Fanniidae هستند را از گونه هاي گوشت خوراكي شناسايي كردند. ميزان حد تشخيص اين مجموعه از آغازگر ها 219 آتوگرم بر ميكروليتر اندازه گيري شد.
شماره ركورد
232764
دانشگاه
دانشگاه اصفهان
رشته تحصيلي
زيست فناوري ميكروبي
استاد راهنما
محسن گلابي