بررسي اثر عصاره گياه قره قاط بر روي الگوي آنتي بيوگرام، تشكيل بيوفيلم و بيان ژن هاي اتصالي A afa،A sfa، G pap وB fim در سويه‌هاي اشريشيا كلاي جدا شده از بيماران مبتلا به عفونت ادراري مراجعه كننده به مراكز بهداشتي درماني سنندج در سال 1403-1402

دانشگاه علوم پزشكي كردستان

ميكروب شناسي

زمينه و هدف: دومين عفونت باكتريايي شايع در سراسر جهان، عفونت دستگاه ادراري است. اشرشياكلي اروپاتوژنيك مسئول بيش از 75 درصد موارد اين عفونت است. اتصال باكتري هاي بيماري زا به سلول ميزبان نقش اساسي در پاتوژنز دارد و اين عمل در E.coli توسط اندامك هاي مو مانند موسوم به فيمبريا ناميده مي شود. انواع مختلف فيمبريا شناخته شده است. مانند: فيمبرياي نوع 1 (نقش fimC در مونتاژ آن با رمزگذاري چاپرون براي تا كردن) و نوع S حساس به d-مانوز و فيمبرياي نوع P (كد شده توسط papG) و afa مقاوم به d-mannose بيان اين ژن ها در حالت پلانكتون كمتر از زماني است كه باكتري ها يك بيوفيلم تشكيل مي دهند. تشكيل بيوفيلم باكتري ها را نسبت به درمان مقاوم تر مي كند. افزايش مقاومت به آنتي بيوتيك ها به دليل وجود بيوفيلم ها، دانشمندان را به جستجوي جايگزين هايي براي آنتي بيوتيك ها سوق داده است. گياهان دارويي همواره جهت درمان يا پيشگيري از عفونت هاي ادراري (بيش از 10 هزار گياه) استفاده مي شدندكه قره قاط يكي از اين موارد مي باشد. مواد و روش ها: در اين مطالعه مقطعي، 25 ايزوله E. coli از نمونه ادرار بيماران مراجعه كننده به مراكز درماني سنندج در محيط BHI جمع آوري شد. پس از كشت نمونه ها و تشخيص قطعي باكتري E. coli عصاره كرن بري تهيه و رقت MIC آن تعيين شد. سپس تست حساسيت به آنتي بيوتيك به روش ديسك ديفيوژن قبل و بعد از مجاورت با گياه در رقت MIC انجام شد. پس از آن، آزمايش تشكيل بيوفيلم در پليت 96 چاهكي به صورت دوپلكس انجام شد، چاهك ها با كريستال ويوله رنگ آميزي شدند. اين آزمايش نيز قبل و بعد از مجاورت با رقت MIC قره قاط انجام شد. به منظور انجام آزمايش‌هاي مولكولي ابتدا DNA باكتري استخراج شد و سپس PCR براي به دست آوردن فراواني ژن‌هاي afa، sfa، pap و fim انجام شد. و در نهايت استخراج RNA و انجام Real time PCR جهت تعيين كمي بيان ژن هاي اتصالي مذكور پيش و پس از مجاورت با رقت MIC قره قاط انجام شد. يافته ها: در بررسي آنتي بيوگرام نمونه‌هاي ادرار مشخص شد بيشترين حساسيت به ترتيب به آنتي‌بيوتيك‌هايFM OFX-NOR- وجود دارد و بيشترين مقاومت در نمونه‌هاي ادرار به ترتيب به AMX-SXT-NA وجود دارد. در بررسي آنتي بيوگرام نمونه‌هاي ادراري پس از مجاورت با رقت MIC عصاره ي قره قاط بيشترين حساسيت ترتيب مربوط به NA-CFM-FM و بيشترين مقاومت به ترتيب مربوط به SXT-CP-OFX مي‌باشد. در ارزيابي تشكيل بيوفيلم نتايج حاكي از آن بود كه رقت MIC عصاره ي گياه قره قاط قادر است تشكيل بيوفيلم را در تمام نمونه هاي باليني مهار كند. در بررسي ژن‌هاي اتصالي بوسيله PCR ژن pap بيشترين نقش را در اتصال باكتري موجود در نمونه‌هاي ادرار و مدفوع به سطوح بافت ميزبان داشت. مقايسه نتايج Real time PCR نمونه‌ هاي اشريشياكلاي به دست آمده از نمونه ادرار بيماران مبتلا به عفونت ادراري، نشان مي‌دهد، ميزان بيان ژن هاي ادهزين مورد بررسي در اين مطالعه در pap، fim، sfa پس از مجاورت با رقت MIC عصاره ي گياه كاهش يافت. نتيجه گيري: يافته هاي مطالعه ي حاضر حاكي از آن است كه استفاده از گياه قره قاط به عنوان عامل كمك درماني در كنار آنتي بيوتيك هاي اسيدوفيل، با توجه به مقاومت آنتي بيوتيكي روز افزون مي تواند اثر بخش باشد. همچنين با در نظر گرفتن اثر بازدارندگي عصاره گياه بر تشكيل بيوفيلم و ادهزين ژن ها مي توان با مهار مرحله ي اساسي پاتوژنز يعني اتصال از اين گياه به عنوان عاملي جهت پيشگيري از عفونت ادراري بهره جست. كلمات كليدي: اشريشيا كلاي؛ عفونت مجراي ادراري؛ بيوفيلم؛ قره قاط؛ PCR ؛ Real time PCR؛ بيوفيلم؛ مقاومت آنتي بيوتيكي؛ ژن هاي afaA ,sfaA , papG ,fimB

236716

دانشگاه علوم پزشكي كردستان

ميكروب شناسي

پزشكي

دانشگاه علوم پزشكي كردستان

آرزو طاهرپور، منصور صديقي