بررسي ويژگي

دانشگاه ولي عصر﴿عج﴾

ارشد

ويروس موزاييك زرد لوبيا (از خانواده پوتي ويريده و جنس پوتي ويروس) به علت دارا بودن دامنه ميزباني وسيع مي‌توانند بر روي محصولات مختلف خسارت زيادي وارد كند. در پژوهشي كه اخيرا در مزارع استان اصفهان صورت گرفت جدايه‌اي از اين ويروس براي اولين بار از گياه آفتابگردان به عنوان ميزبان طبيعي جداسازي شد كه به اختصار BYSun نام‌گذاري شد. خالص سازي فيزيكي جدايه‌ي مورد مطالعه با استفاده از دو دور سانتريفوژ افتراقي بر روي بالشكهاي سوكروز 20%و30% انجام گرفت. از هر 100 گرم بافت آلوده هر يك از جدايه ها حدود 20-15 ميلي‌گرم ويروس خالص بدست آمد. وزن مولكولي پروتئين پوششي آموده ويروس خالص BYSun به روش SDS-PAGE، 5/33 كيلو دالتون برآورد گرديد. آنتي سرم جدايه مورد بررسي با استفاده از پنج تزريق هفتگي آموده خالص ويروس به خرگوش تهيه شد. اين آنتي سرم در آزمون نشت دو طرفه در آگار حاوي SDSبا عصاره گياهان آلوده توليد يك خط رسوب نمود اما در مقابل عصاره گياه سالم فاقد واكنش بودند. نتايج آزمون اليزا نيز مشخص كرد رقت 2500/1 گاماگلوبولين اين آنتي سرم از نظر اقتصادي مناسبترين رقت مي باشد. براي تكثير ژنوم كامل ويروس BYSun از سه راهكار كلي، بهره‌گيري از آغازگرهاي دژنره، تكثير انتهاي 5` با استفاده از روش 5` RACE و به‌كار‌گيري آغازگرهاي اختصاصي استفاده گرديد. ژنوم جدايه BYSun داراي 9547 نوكلئوتيد بدون در نظر گرفتن دنباله پلي A مي‌باشد. آناليز توالي‌ها نشان داد كه اين ويروس داراي يك چهارچوب خوانش(ORF) بلند به طول 9168 نوكلئوتيد مي‌باشد كه از موقعيت 206 نوكلئوتيدي شروع شده و با كدون UAG در موقعيت 9374 خاتمه مي‌يابد. تركيب بازها در ژنوم به اين صورت است كه آدنين با 3160 (09/33%) بيشترين و سيتوزين با 1673 (52/17%) كمترين ميزان را دارد. تعداد باز‌هاي گوانين 2185 (88/22%) و اوراسيل 2529 (48/26%) مي‌باشد. همچنين اين ORF يك پلي‌پروتئين به طول 3056 آمينواسيد را كد مي‌كند كه نه سايت برش روي توالي آن شناسايي شد. مقايسه ترادف نوكلئوتيدي و آمينو اسيدي به دست آمده با ترادف‌هاي موجود در GenBank در پايگاه اطلاعاتي NCBI با استفاده از برنامه BLAST بيشترين شباهت را با جدايه BYMV-S از استراليا نشان داد. هم‌رديف‌سازي چندگانه حاصل از مقايسه ترادف نوكلئوتيدي كل ژنوم، كمترين و بيشترين ميزان شباهت را با ساير جدايه‌هاي BYMV به ترتيب با 75 و 98 درصد نشان داد. نتايج هم‌رديف‌سازي چندگانه پلي پروتئين BYSun در سطح آمينو اسيدي نشانگر شباهت 85 تا 99 درصدي با ساير جدايه‌هاي BYMV مي‌باشد. تجزيه و تحليل درخت هاي فيلوژنتيك حاصل از مقايسه ترادف قسمت‌هاي مختلف ژنوم BYSun (به‌خصوص ناحيه CP) با ساير جدايه‌هاي BYMV نشان داد اين جدايه‌ها در هشت گروه General ، Lupin ، Monocot ، Broad bean ، W ، Pea ، Canna و S قابل تفكيك هستند كه تا حدود زيادي با منشاء ميزباني آن‌ها مطابقت دارد. جدايه BYSun به همراه BYMV-S در شاخه S جاي مي‌گيرد. ويروس BYSun اولين جدايه از ويروس موزاييك زرد لوبيا است كه ژنوم آن در ايران به صورت كامل تغيين ترادف شده است.

49722

دانشگاه وليعصر رفسنجان

ثمين السادات حسيني

بيماري شناسي

احمد حسيني