عنوان
بررسي اثرات ضدسرطاني كتوپروفن و ويتامينD بر ميزان بيان ژن HE4و زيست‌پذيري سلول‌هاي سرطاني تخمدان رده A2780S
رشته تحصيلي
زيستشناسي جانوري- زيست شناسي سلول و تكويني
تاريخ دفاع
10/19/2020 12:00:00 AM
كليدواژه فارسي
سرطان تخمدان , رده‌سلولي A2780S , ويتامينD , كتوپروفن , ژن HE4
چكيده
سرطان تخمدان يكي از بدخيمي‌هاي شايع زنان است كه در ايران دومين علت مرگ‌ومير نسبت به ساير بيماري‌هاي ژنيكولوژيك را به خود اختصاص داده است. نرخ كشندگي بالاي آن، ناشي از تأخير در تشخيص مي‌باشد. مطالعات اپيدميولوژيكي بسياري نشان مي‌دهد كه كاهش توليد ويتامينD باعث افزايش ابتلا به سرطان تخمدان مي‌شود. مسيرهاي بيولوژيكي گسترده‌اي مانند تقسيم‌سلولي، تمايز و مرگ‌سلولي، ايجاد موتاسيون در گيرنده آن باعث كاهش دريافت ويتامينD و نتيجتاً افزايش خطر ابتلا به سرطان تخمدان مي‌گردد؛ هم‌چنين با توجه به نقش آنزيم‌هاي سيكلواكسيژناز و توليد پروستاگلاندين E2 در ايجاد ضايعات توموري، NSAIDها با مهار COX و القاي مرگ‌سلولي از طريق فعال‌سازي كاسپاز و متوقف ساختن چرخه‌سلولي، خاصيت ضدتوموري نشان مي‌دهند؛ علاوه بر آن به كارگيري تركيباتي به عنوان مهاركننده غيرانتخابي سيكلواكسيژنازها مانند كتوپروفن مي‌تواند مانع از ايجاد سرطان شود. پيشرفت‌هاي اخير در زمينه تكنولوژي‌هاي ژنوميك و پروتئوميكس منجر به شناخت بيوماركرهايي براي تشخيص سرطان تخمدان شده است. يكي از حساس‌ترين تومورماركرهايي كه بررسي بيماري يا پيشرفت سرطان اپي‌تليال تخمدان شناخته شده، HE4 است. بيان اين ژن در انواع مختلف سرطان تخمدان افزايش مي‌يابد. اين مطالعه به منظور تعيين اثرات ضدسرطاني كتوپروفن و ويتامينD بر زيست‌پذيري سلول‌هاي سرطاني تخمدان رده A2780S و ميزان بيان ژن HE4 انجام شد. در اين راستا از رده‌سلولي A2780S سرطان تخمدان استفاده شد و از روش‌هاي متداول كشت‌سلولي استفاده گرديد. براي محاسبه IC50، سلول‌ها با غلظت‌هاي مختلف كتوپروفن و ويتامينD به مدت 24 ساعت تيمار شدند، سپس سلول‌ها با غلظت دارويي مناسب به دست‌آمده از روش IC50 تيمار و به مدت 24، 48 و72 ساعت انكوبه شدند. بدين نحو غلظت و زمان مؤثر داروها تعيين شد. سپس سلول‌ها براي استخراج RNA كشت شدند. پس از استخراج RNA، سنجش كيفيت، ميزان جذب نوري نمونه‌ها و ميزان غلظت مورد نياز به وسيله دستگاه نانودراپ بررسي شد. پس از آن سنتز cDNA صورت گرفت. از آزمون Real time PCR براي سنجش اثر داروها بر تغيير بيان ژن HE4 استفاده شد و از طريق روش -ΔΔCT2 آناليز صورت گرفت. نهايتاً تغييرات بياني توسط روش‌هاي آماري در نرم‌افزار Excel و GraphPad Prism انجام شد. نتايج IC50 نشان داد، داروي كتوپروفن با غلظت µM7/583 و ويتامينD با غلظت µM359/0، حداقل دوزي هستند كه باعث زنده‌ماني 50 درصد سلول‌ها مي‌شوند، هم‌چنين بيش‌ترين كاهش در ميزان سلول‌هاي زنده نسبت به گروه كنترل در زمان 24 ساعت براي هر دو دارو با 05/0P< معنادار بود. بيان ژن HE4 در سلول‌هايي كه با داوري كتوپروفن تيمار شده بودند در مقايسه با سلول‌هاي گروه كنترل، كاهش يافت كه فعاليت ضدسرطاني كتوپروفن و كاهش زيست‌پذيري سلول‌هاي سرطاني تخمدان را اثبات مي‌نمايد؛ اما تيمار سلول‌ها با ويتامينD موجب افزايش بيان HE4 شد كه نشان‌دهنده اثر منفي ويتامينD در مقابله با سرطان، زماني كه به تنهايي در تيمار‌سلولي مورد استفاده قرار گيرند، مي‌باشد. هنگامي كه كه هر دو دارو به‌طور هم‌زمان استفاده شدند، باعث كاهش بيان ژن شد و روند كاهش بيان در سلول‌هايي كه به تنهايي داروي كتوپروفن را دريافت كرده بودند، نسبت به سلول‌هايي كه هر دو دارو را به صورت هم‌زمان دريافت كردند، بيش‌تر بود. تحقيقات بيش‌تري جهت تأييد اين نتايج و شناسايي دقيق مكانيسم عمكرد اين دو دارو در آينده ضرورت دارد.
شماره ركورد
76917
دانشگاه
دانشگاه اردکان
استاد راهنما
مجيد مروتي شريف آباد Morovati SharifAbad Majid , الهام صالحي Salehi Elham