بررسي نقش ميكرو RNAهاي mir-483-3p و mir-216b در سيكل سلولي و قابليت بقاي سلول هاي سرطان پستان و بيان انكوژن هيستون داستيلاز 8 (HDAC8)

دانشگاه علوم پزشكي كردستان

پزشكي مولكولي

چكيده: عنوان: بررسي نقش ميكرو RNAهاي mir-483-3p و mir-216b در سيكل سلولي و قابليت بقاي سلول‌هاي سرطان پستان و بيان انكوژن هيستون داستيلاز 8 (HDAC8) سابقه: اختلال در بيان microRNA ها و هيستون داستيلازها جزو عوامل رايج اپي¬ژنتيك هستند كه در متاستاز و عود مجدد سرطان سينه نقش دارند. در اين مطالعه با استفاده از آناليز بيوانفورماتيك، miR-216b-5p و miR-483-3p به عنوان miRNAهاي هدف گيرنده ي ژن HDAC8 انتخاب شدند. تا جايي كه ما اطلاع داريم تاكنون مطالعه و نتايجي ديگري در مورد نقش اين ميانكنش در پيشرفت سرطان وجود ندارد. هدف: در مطالعه حاضر، تاثير miR-216b-5p و miR-483-4p بر HDAC8 و نقش آن‌ها در پيشرفت سرطان پستان (Breast cancer) موردبررسي قرار گرفت. روش بررسي: نمونه‌هاي سرطان پستان و بافت‌هاي غير سرطاني از از تومور بانك ايران تهيه شد. رده هاي سلولي سرطاني (MDA-MB-231, MCF-7) و سلول‌هاي اپيتليال نرمال پستان (MCF-10A) از مركز ذخاير ژنتيك (ايران، تهران) خريداري گرديد. سطح بيان ژن HDAC8 و بيان miR-216b-5p و miR-483-3p با استفاده از روش RT-qPCR در نمونه‌هاي بافتي و سل لا ين‌ها تعيين شد. سطح پروتئين HDAC8 با استفاده از روش وسترن بلات اندازي گيري شد. چرخه سلولي، تكثير سلولي و تشكيل كلوني به ترتيب با استفاده از تكنيك هاي فلوسايتومتري، MTT و تست كلوژنيسيتي مورد تحليل قرار گرفت و نقش فيزيوپاتولوژيك HDAC8 با ناك اوت اين ژن با استفاده از تكنيك CRISPR/Cas9 در سلول‌ها سرطاني بررسي گرديد. هدف‌گيري ناحيه 3′UTR ژن HDAC8 به‌وسيله miR-216b-5p و miR-483-3p با استفاده از روش سنجش لوسيفراز تائيد شد. يافته‌ها: نتايج ما نشان داد كه بيان miR-216b-5p و miR-483-3p در نمونه‌هاي سرطان پستان انساني و سل لا ين‌ها سرطاني كاهش داشت. از طرف ديگر بيان ژن HDAC8 در نمونه‌هاي سرطاني و سل لا ين‌ها به طور معناداري افزايش داشت. القاء بيان miR-216b-5p و miR-483-3p در سل لاين‌هاي سرطاني پستان باعث مهار تكثير سلولي شد و از طرف ديگرمهار miR-216b-5p و miR-483-3p اثرات متضادي را نشان داد. ما تائيد كرديم كه ژن HDAC8 به‌صورت مستقيم توسط miR-216b-5p و miR-483-3p كنترل و تنظيم مي‌شود. ناك اوت ژن HDAC8 اثراتي مشابه افزايش بيان miR-483-3p و miR-216b-5p را نشان داد. علاوه بر اين ما مشخص كرديم كه سطح بيان miR-483-3p و miR-216b-5p با متاستاز گره‌هاي لنفاوي و اندازه تومور ارتباط معكوسي داشت. بحث و نتيجه‌گيري: در مجموع داده‌هاي ما نشان داد كه بيان بالاي miR-216b-5p و miR-483-3p مي‌تواند رشد سل لاين‌هاي سرطان پستان را از طريق كاهش بيان HDAC8 كاهش دهد؛ بنابراين، مهار بيان ژن HDAC8 توسط miR-216b-5p و miR-483-3p مي¬تواند در توسعه و ابداع درمان‌هاي جديد سرطان پستان كمك كننده باشد. كلمات كليدي: سرطان پستان، هيستون داستيلاز8، miR-483 ، miR-216b ، پيشرفت سرطان

81216

دانشگاه علوم پزشكي كردستان

پزشكي مولكولي

پزشكي

دانشگاه علوم پزشکي کردستان

محمد عبدي، عباس احمدي